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熱烈祝賀中實同創新品PCR試劑盒系列產品上市啦
Supersmart 5×快速SYBR Green qPCR預混液
產品貨號：ZS-M-1009
產品規格：50TX50ul體系
所屬類別：熒光定量PCR
簡介：
本試劑盒采用穩定高效的反轉錄預混體系 5× RT Master mix進行RNA的反轉錄反應，使用時只需加入模板、引物和 RNase Free H2O即可，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差和RNA的降解可能。Master mix中添加了HL dsDNase（熱敏雙鏈特異性核酸酶），該雙鏈特異性核酸酶可在反轉錄的過程中，直接高效降解去除RNA中殘留的基因組DNA污染(可去除100 ng基因組DNA)，從而在定量PCR的檢測中無需考慮基因組污染的干擾，設計的定量PCR引物也無需進行橫跨外顯子。該試劑盒尤其適用于定量PCR檢測。
該預混體系包含點突變致RNase活性缺失的MuLV Reverse Transcriptase反轉錄酶、dNTP、反應Buffer、HL dsDNase和RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉錄酶去除了RNase H活性，從而避免反轉錄過程中降解RNA。同時經過突變文庫篩選，使得其熱穩定性更強，可耐受 55℃高溫反應，從而進一步提高了其反轉錄效率和反應速率。相比于低溫條件下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可顯著打開RNA二級結構，從而提高復雜 RNA模板的擴增性能、提高反轉錄cDNA的長度和產量，從而提高后續檢測的靈敏度。高溫反轉錄對于高GC含量RNA的反轉錄，能有效減少二級結構，提升反轉錄效率。在通讀GC含量高，二級結構復雜的RNA模板和反轉錄長片段cDNA等方面的表現突出。精心優化的反應 Buffer使逆轉錄酶應用范圍更廣，對后續的PCR以及定量PCR實驗兼容性高。合成的第一鏈cDNA 可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴增、Real-Time PCR 反應等,以及cDNA文庫的構建，尤其是反轉錄所得目的基因的克隆等。還可以通過反轉錄用于DNA探針的熒光、生物素、地高辛或同位素標記等。
用途：
（1）該制品可有效反轉錄 mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA等
（2）該制品不可反轉錄 microRNA、病毒 DNA/RNA 樣品
組分：
名稱 | 50T | 100T |
5× RT Master mix (with HL dsDNase) | 200 μl | 400 μl |
20× Oligo dT & Random Primer | 50 μl | 100 μl |
RNase Free H2O | 1 ml | 1 ml × 2 |
使用方法：
1. 按以下組分配制反轉錄反應液
Total RNA or Poly(A) RNA | 0.1-2 μg |
5× RT Master mix(with HL dsDNase) | 4 μl |
*20×Oligo dT & Random Primer | 1 μl |
Rnase Free H2O | Up to 20 μl |
*注：反轉錄引物可根據需要改用特異性引物。
2.根據實際情況反轉錄可選擇快速程序或標準程序
快速程序
37°C 15~30min
85°C 5min
標準程序
25°C 10min
55°C 30~60min
85°C 5min
注：通常在定量 PCR 實驗中使用快速程序進行反轉錄（反轉錄效率>80%），在進行高GC含量、含復雜二級結構、長片段的模板轉錄時采用標準程序（反轉錄效率>100%）。
中實同創 Q公司
β-actin
mcp
Fig 1. SupersmartTM TRIZOL裂解液提取的小鼠心肌細胞HL-1的RNA，中實基因該反轉錄試劑盒與其他品牌反轉錄試劑盒比較，使用2×Hi SYBR Green qPCR Mix對基因β-actin和MCP進行qPCR檢測Actin和MCP基因。
注意事項：
如 5× RT Master mix (with HL dsDNase)出現沉淀屬正常現象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實驗結果。
儲存：
請置于-20°C，可保存 3 年；避免反復凍融。
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